Typowe składniki Amikroskop fluorescencyjnyCzy:
Barwniki fluorescencyjne (fluorofory)
Fluorofor to związek fluorescencyjny, który po wzbudzeniu światłem ponownie emituje światło.
Fluorofory zazwyczaj zawierają kilka związanych grup aromatycznych lub są cząsteczkami planarnymi lub cyklicznymi z kilkoma wiązaniami π.
Dla wielu biomolekuł zaprojektowano wiele barwników fluorescencyjnych.
Niektóre z nich to małe cząsteczki, które z natury są fluorescencyjne i wiążą daną biomolekułę. Najlepszymi przykładami są barwniki kwasów nukleinowych, takie jak DAPI i Hoechst, falloidyna, które są stosowane do barwienia włókien aktynowych w komórkach ssaków.
źródło światła
Stosowane są cztery główne typy źródeł światła, w tym ksenonowe lampy łukowe lub lampy rtęciowe z filtrami wzbudzenia, lasery i diody LED dużej mocy.
Lasery są stosowane głównie w wyrafinowanych technikach mikroskopii fluorescencyjnej, natomiast lampy ksenonowe, lampy rtęciowe i diody LED z dichroicznymi filtrami wzbudzenia są powszechnie stosowane w mikroskopii fluorescencyjnej o szerokim polu widzenia.
Filtr wzbudzenia
Wzbudnik jest zwykle filtrem pasmowo-przepustowym, który przepuszcza tylko długości fal pochłaniane przez fluorofor, minimalizując w ten sposób wzbudzenie z innych źródeł fluorescencyjnych i blokując światło wzbudzenia w paśmie emisji fluorescencji.
lustro dichroiczne
Filtr dichroiczny lub filtr cienkowarstwowy to bardzo precyzyjny filtr kolorowy używany do selektywnego odbijania światła w niewielkim zakresie kolorów, jednocześnie odzwierciedlając inne kolory.
Filtr emisji.
Emiter jest zwykle filtrem pasmowo-przepustowym, który przepuszcza tylko długość fali emitowaną przez fluorofor i blokuje całe niepożądane światło poza tym pasmem, zwłaszcza światło wzbudzające.
Filtry zapewniają minimalne tło poprzez odfiltrowanie niepożądanej energii wzbudzenia (w tym UV i IR) lub autofluorescencji próbki i systemu.
